二手流式細胞儀常規檢測時的樣品怎么制備

　　二手流式細胞儀是一種基于常規流式細胞術的技術，其中光譜儀和多通道檢測器代替了常規系統中的傳統反射鏡，濾光器和光電倍增管。可以快速進行多參數收集并分析單個細胞或顆粒上的數據。

 

　　流二手流式細胞可以快速測量、存貯、顯示懸浮在液體中的分散細胞的一系列重要的生物物理、生物化學方面的特征參量，并可以根據預選的參量范圍把細胞亞群從中分選出來。儀器采用激光作為激發光源，保證其具有更好的單色性與激發效率;利用熒光染料與單克隆抗體技術結合的標記技術，保證檢測的靈敏度和特異性;用計算機系統對流動的單細胞懸液中單個細胞的多個參數信號進行數據處理分析，保證了檢測速度與統計分析精確性。
 

　　二手流式細胞儀常規檢測時的樣品制備
 

　　(一)直接免疫熒光標記法
 

　　取一定量細胞(約1X106細胞/ml)，直接加入連接有熒光素的抗體進行免疫標記反應(如做雙標或多標染色，可把幾種標記有不同熒光素的抗體同時加入)，孵育20～60分鐘后，用PBS(pH7.2～7.4)洗1～2次，加入緩沖液重懸，上機檢測。本方法操作簡便，結果準確，易于分析，適用于同一細胞群多參數同時測定。雖然直標抗體試劑成本較高，但減少了間接標記法中較強的非特異熒光的干擾，因此更適用于臨床標本的檢測。
 

　　(二)間接免疫熒光標記法
 

　　取一定量的細胞懸液(約1X106細胞/ml)，先加入特異的*抗體，待反應*后洗去未結合抗體，再加入熒光標記的第二抗體，生成抗原-抗體-抗抗體復合物，以FCM檢測其上標記的熒光素被激發后發出的熒光。本方法費用較低，二抗應用廣泛，多用于科研標本的檢測。但由于二抗一般為多克隆抗體，特異性較差，非特異性熒光背景較強，易影響實驗結果。所以標本制備時應加入陰性或陽性對照。另外，由于間標法步驟較多，增加了細胞的丟失，不適用測定細胞數較少的標本。